潔凈室（區）沉降菌的監測（全面）

一、監測依據
1、《中華人民共和國國家標準（醫藥工業潔凈室（區）沉降菌的測試方法）》GB/T 16294-2010。
2、《藥品生產質量管理規范》（2010年修訂）。
二、檢測原理
沉降菌的測試方法采用沉降法，即通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養基平皿，經若干時間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落進行計數，以平板培養皿中的菌落數來判定潔凈環境內的活微生物數，并以此來評定潔凈室（區）的潔凈度。
三、監測要求
1、測試條件
（1）溫度和相對濕度：潔凈室（區）的溫度和相對濕度應與其生產及工藝要求相適應（無特殊要求時，溫度在18～26℃，相對濕度在45%～65%為宜），同時還應滿足測試儀器的使用范圍。
（2）室內壓差、送風量或風速應符合要求。
（3）高效過濾器的泄漏測試應符合要求。
2、測試狀態
（1）沉降菌測試前，被測試潔凈室（區）的溫度、濕度須達到規定的要求，靜壓差必須控制在規定值內。
（2）沉降菌測試前，被測試潔凈室（區）已經過消毒。
（3）測試狀態有靜態和動態兩種，測試狀態的選擇必須符合生產的要求，并在報告中注明測試狀態。
3、測試時間
（1）靜態a：單向流潔凈室（區）在空氣凈化系統正常運行10min后開始，非單向流潔凈室（區）在空氣凈化系統正常運行30min后開始。
（2）靜態b：單向流潔凈室（區）在生產操作人員撤離現場自凈10min后開始；非單向流潔凈室（區）在生產操作人員撤離現場，自凈20min后開始。
（3）在動態測試時，則須記錄生產開始的時間以及測試時間。
備注：靜態a指潔凈室（區）在空氣凈化系統已經安裝完畢且功能完備的情況下，生產工藝設備已安裝、潔凈室（區）內沒有生產人員的狀態。
靜態b指潔凈室（區）在生產操作全部結束，生產操作人員撤離現場并經過20min自凈后的狀態。
四、采樣
1、最少采樣點數目的確定
根據潔凈室（區）面積大小和潔凈級別要求不同確定最少采樣點數目，按國家標準要求，采樣在滿足最少采樣點數的同時還應滿足最少培養皿數。不同級別的潔凈室（區）最少采樣點數可按下表確定：

備注：表中的面積對于單向流潔凈室指的是送風面積，對于非單向流潔凈室指的是房間面積。
最少培養皿數按下表確定：

2、采樣點的布置
（1）工作區測試點位置離地0.8～1.5m。
（2）可在關鍵設備或關鍵工作活動范圍處增加測試點。
（3）采樣點的布置力求均勻，避免采樣點在某局部區域過于集中或稀疏。
3、測試步驟
（1）測試前，用75%乙醇棉球或0.1%新潔爾滅溶液擦拭培養皿外表面后，將培養皿放入傳遞窗內殺菌至少30min。
（2）將已制備好的培養基平皿面朝上按采樣點布置圖由內至外逐個放置，逐一打開皿蓋，把培養皿蓋朝下斜靠在培養皿邊緣，使培養皿表面暴露在空氣中1h以上，但不大于4h，再講培養皿蓋好后倒置。
（3）靜態測試時，培養皿暴露時間為30min以上；動態測試時，單個沉降碟的暴露時間可以少于4h，同一位置可使用多個沉降碟連續進行監測，并積累計數，直至監測時間累計達到4h。
采樣注意事項：
（1）測試人員必須穿戴符合環境潔凈度級別的工作服。
（2）靜態測試時，室內測試人員不得多于2人。
（3）對于單向流潔凈室（區）或送風口，采樣器采樣口朝向應正對氣流方向；對于非單向流潔凈室（區），采樣口向上。
（4）布置采樣點時，至少應盡量避開塵粒較集中的回風口。
（5）采樣時，測試人員應站在采樣口的下風側，并盡量少走動。
（6）應采取一切措施防止采樣過程的污染和其它可能對樣本的污染。
五、培養
（1）全部采樣結束后，將培養皿倒置于恒溫培養箱中培養，注意觀察菌落生長情況。
（2）采用大豆酪蛋白瓊脂培養基配制的培養皿經采樣后，在30～35℃培養箱中培養，時間不少于2天；采用沙氏培養基配制的培養基經采樣后，在20～25℃培養箱中培養，時間不少于5天。
（3）每批培養基應有對照試驗，檢驗培養基本身是否污染。可每批選定3只培養皿作對照培養。
六、菌落計數
（1）用肉眼對培養皿上所有的菌落直接計數、標記或在菌落計數器上點計，然后用5～10倍放大鏡檢查有無遺漏。
（2）若培養皿上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上菌落計數，不能分辨時，以1個菌落計數。
七、計算結果
用計數方法得出各個培養皿的菌落數之和，每個檢測點的沉降菌平均菌落數用下式計算：

式中，為平均菌落數
    M1為1號培養皿菌落數
    M2為2號培養皿菌落數
    Mn為n號培養皿菌落數
    n為培養皿總數
八、結果與判定
每個測點的沉降菌平均菌落數必須低于所選定評定標準中的界限。在靜態測試時，若某測點的沉降菌平均菌落數超過評定標準，則應重新采樣兩次，兩次測試結果均合格才能判為符合。不同級別潔凈室（區）沉降菌技術指標見下表所示：

九、記錄
潔凈室（區）沉降菌的監測應填寫記錄，監測報告應包含以下內容：
（1）測試者的名稱和地址，測試日期。
（2）測試依據。
（3）被測潔凈室（區）的平面布置。
（4）有關測試儀器及其測試方法的描述。
（5）測試結果，包括所有統計計算資料。