微生物污染數(shù)據(jù)的評(píng)價(jià)

一、初始檢測(cè)階段對(duì)生物污染數(shù)據(jù)的評(píng)估
1、對(duì)生物污染現(xiàn)狀與程度的判斷
采用直接和間接的生物污染監(jiān)測(cè)方法采集樣品以對(duì)污染現(xiàn)狀與程度作出判斷時(shí)，應(yīng)注意以下重要因素：
（1）足夠量的采樣樣品資料資料及其均一性，如需要對(duì)樣品進(jìn)行稀釋時(shí)，應(yīng)關(guān)注其稀釋的精確性。
（2）各種不同的活性粒子隨時(shí)間的變化趨勢(shì)，采樣過程對(duì)其成活與恢復(fù)的影響。
（3）從受控環(huán)境或危險(xiǎn)區(qū)的各個(gè)科學(xué)選定的采樣點(diǎn)取得微生物污染數(shù)據(jù)。
（4）所采用的培養(yǎng)技術(shù)與估算方法的可靠性。
（5）分析方法的選擇（定性或定量的估算）。
2、生物污染數(shù)據(jù)采集
為了得到合適的目標(biāo)值，在初始監(jiān)測(cè)階段，一般都要經(jīng)歷一段對(duì)受控環(huán)境內(nèi)活性粒子頻繁采樣的過程。隨著對(duì)生物污染情況和規(guī)律的了解，其采樣頻率可適當(dāng)下降。根據(jù)上述初期采樣的結(jié)果，結(jié)合受控區(qū)域或危險(xiǎn)區(qū)域的使用要求，由用戶對(duì)各區(qū)域設(shè)定適當(dāng)?shù)哪繕?biāo)值，再根據(jù)目標(biāo)值導(dǎo)出報(bào)警值和行動(dòng)值。這些值并非就此固定不變，可以根據(jù)所獲得的更大量的監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)的條件下，在認(rèn)為必要時(shí)作出適當(dāng)調(diào)整。
3、生物污染計(jì)數(shù)技術(shù)的驗(yàn)證
每項(xiàng)日常使用的計(jì)數(shù)技術(shù)及估算方法都要經(jīng)過驗(yàn)證。驗(yàn)證計(jì)數(shù)方法應(yīng)考慮以下內(nèi)容：
（1）所關(guān)注的活性粒子類別及其預(yù)期值。
（2）所選擇的培養(yǎng)基是否具備維持活性粒子生長(zhǎng)和確保恢復(fù)的能力。
（3）對(duì)于選定的培養(yǎng)基所選擇的培養(yǎng)條件是否保證活性粒子充分生長(zhǎng)。
（4）所選擇的培養(yǎng)時(shí)間是否足以讓合適的采樣品顯現(xiàn)出可靠的活性計(jì)數(shù)。
（5）采用依據(jù)微生物新陳代謝活動(dòng)估算活性單位的可能性。
4、記錄與存檔
完整的記錄與存檔是生物受控環(huán)境管理工作的首要環(huán)節(jié)，以下一些方面都應(yīng)從歸檔的材料中找到：
（1）檢測(cè)方法、程序的議定文件。
（2）所用儀器的所有常規(guī)或定期檢查、標(biāo)定記錄和證書。
（3）原始觀測(cè)、計(jì)算、推導(dǎo)的數(shù)據(jù)和后報(bào)告的記錄。
（4）記錄中必須有實(shí)施采樣、準(zhǔn)備、測(cè)試、評(píng)價(jià)和撰寫報(bào)告的有關(guān)人員的姓名及簽字。
（5）所有保存在計(jì)算機(jī)中的資料均應(yīng)有備份，以防丟失。
二、日常監(jiān)測(cè)階段所得生物污染數(shù)據(jù)的估算與評(píng)價(jià)
日常監(jiān)測(cè)工作中，除去例行的采樣數(shù)據(jù)、采集記錄與評(píng)價(jià)外，與初始監(jiān)測(cè)的不同之處在于強(qiáng)調(diào)以統(tǒng)計(jì)的觀點(diǎn)、趨勢(shì)分析和控制圖示等方法對(duì)微生物數(shù)據(jù)予以評(píng)價(jià)。這方面的要求對(duì)用戶相關(guān)管理人員的要求較高。但從國(guó)外的觀點(diǎn)來看，只有這樣，才能保證生物污染控制目標(biāo)的實(shí)現(xiàn)。
1、在日常監(jiān)測(cè)工作中，需要注意的問題是：
（1）采樣所得的樣品必須有清楚的標(biāo)識(shí)，保證樣品與其結(jié)果對(duì)應(yīng)無誤。
（2）在微生物采樣的同時(shí)，空調(diào)凈化系統(tǒng)的運(yùn)行狀態(tài)及室內(nèi)的溫度、濕度、潔凈度等環(huán)境參數(shù)應(yīng)予以記錄。
2、數(shù)據(jù)記錄體系
統(tǒng)計(jì)與趨勢(shì)分析都需要依賴數(shù)據(jù)的積累，因此數(shù)據(jù)記錄的體系與方法十分關(guān)鍵，不同的記錄模式將影響數(shù)據(jù)分析的效率。為此應(yīng)開發(fā)并采用能夠明確無誤記錄與歸納處理數(shù)據(jù)的文件體系或軟件，其中應(yīng)包括：
（1）原始數(shù)據(jù)。
（2）記錄中所包含的信息類型目錄。
（3）實(shí)驗(yàn)室文件或計(jì)算機(jī)資料的名稱與位置。
（4）利用工作手冊(cè)、計(jì)算機(jī)或其它適當(dāng)手段記錄下的各種測(cè)試結(jié)果、計(jì)算機(jī)結(jié)果或其它相關(guān)信息。
（5）突出異常樣品值的標(biāo)準(zhǔn)方法。
（6）對(duì)結(jié)果作出修改處的說明與審定。
（7）對(duì)測(cè)試結(jié)果、計(jì)算結(jié)果與報(bào)告進(jìn)行記錄、核查、糾正、簽字等應(yīng)遵循的程序。
3、數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)歸納
對(duì)生物污染數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)計(jì)算之前，特別是在記錄有大量測(cè)試結(jié)果的情況下，必須先將數(shù)據(jù)整理簡(jiǎn)化。為使測(cè)試數(shù)據(jù)的主要特征清楚或數(shù)據(jù)分層，既可用定性方式，即將測(cè)試結(jié)果分組，形成各種頻度的表、圖，也可用描述性的統(tǒng)計(jì)資料來達(dá)到這個(gè)目的。
統(tǒng)計(jì)方法所適用的數(shù)據(jù)，可以是單獨(dú)測(cè)試的結(jié)果，也可以是具有某種特殊特征要素的數(shù)量計(jì)算。
對(duì)于所用統(tǒng)計(jì)方法，應(yīng)有相關(guān)的文件依據(jù)及驗(yàn)證該方法所采用的統(tǒng)計(jì)方式。
4、從統(tǒng)計(jì)學(xué)角度對(duì)微生物數(shù)據(jù)的評(píng)價(jià)
日常監(jiān)測(cè)工作是要從測(cè)試樣品的結(jié)果推斷危險(xiǎn)區(qū)域微生物的數(shù)量。這種推斷確實(shí)免不了存在風(fēng)險(xiǎn)，因?yàn)闃悠酚锌赡懿⑽礈?zhǔn)確的反映所采樣區(qū)域的微生物污染濃度，所以需要利用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法、概率分析法，將這種危險(xiǎn)量化，并將其降低到可接受的水平。
5、趨勢(shì)分析與對(duì)照?qǐng)D
單個(gè)樣品的數(shù)值，其意義通常不充分，這與微生物測(cè)試方法仍存在較嚴(yán)重缺陷造成微生物采樣數(shù)據(jù)的高度變異性分不開。因此，以圖表或其它形式給出某個(gè)時(shí)間段或某個(gè)時(shí)期所采集的數(shù)據(jù)，有助于辨別偏離實(shí)際趨勢(shì)的采樣偏差，或顯示出已發(fā)生的明顯變化，為判定是否仍處于生物污染規(guī)定的偏差范圍內(nèi)提供信息。
三、沉降測(cè)值與浮游測(cè)值的關(guān)聯(lián)
生物污染控制區(qū)、生物潔凈室的檢測(cè)、監(jiān)測(cè)項(xiàng)目中，空氣中懸浮微生物的沉降值與浮游值都被列為重要的測(cè)定數(shù)據(jù)。從概念上來看，空氣中懸浮微生物濃度大，浮游微生物測(cè)量值必然高，沉降測(cè)量值也高。反之，空氣中浮游微生物濃度低，浮游值與沉降測(cè)量值也都低，說明它們之間是有關(guān)聯(lián)的。在許多醫(yī)院等場(chǎng)所，就是通過測(cè)定沉降菌的數(shù)值，以推算空氣中浮游菌的濃度，那么究竟其間的定量關(guān)系是否存在，分析如下：
1、沉降菌與浮游菌的奧式換算公式
在面積為100Cm²的培養(yǎng)基表面上，暴露5min時(shí)間所沉降的微生物數(shù)約等于10L空氣中所含的微生物數(shù)。該關(guān)系可用下式表述：

式中，C為空氣中的懸浮細(xì)菌濃度，CFU/m³
      A為培養(yǎng)基面積，cm²
      t為暴露時(shí)間，min
      N為菌落數(shù)，CFU
奧式公式計(jì)算例題：
某個(gè)直徑D為9cm的標(biāo)準(zhǔn)沉降菌采樣平皿，在被測(cè)環(huán)境的空氣中暴露1h，經(jīng)37℃、48h培養(yǎng)后計(jì)數(shù)，在平皿上觀測(cè)到10個(gè)菌落生成單位，該環(huán)境空氣中的菌濃計(jì)算如下：

空氣中菌濃也可認(rèn)為是浮游菌測(cè)值，與沉降菌測(cè)值之間的比值K為：

2、美國(guó)宇航局標(biāo)準(zhǔn)中不同潔凈環(huán)境的浮游微生物量與沉降量
美國(guó)宇航局標(biāo)準(zhǔn)NASA 5340II中，對(duì)不同潔凈級(jí)別的生物潔凈室的分級(jí)限制，反映了該標(biāo)準(zhǔn)對(duì)空氣中菌濃與沉降菌測(cè)量值之間定量關(guān)系的看法。
NASA 5340II標(biāo)準(zhǔn)關(guān)于生物潔凈室分級(jí)如下表所列：

由表中的數(shù)據(jù)可以看到，把沉降微生物量換算到￠90mm標(biāo)準(zhǔn)雙碟培養(yǎng)平皿，暴露時(shí)間1h，NASA 5340II標(biāo)準(zhǔn)給出的各個(gè)不同級(jí)別的潔凈室，其浮游量（CFU/m³）與沉降量（CFU/￠90.h）的比值十分接近，平均值約為7.17。
與上述奧式公式計(jì)算例題的數(shù)據(jù)對(duì)照，同樣沉降菌的測(cè)量值為10CFU時(shí)，按NASA分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)提供的數(shù)據(jù)作推算，浮游菌濃度為71.7CFU/m^{3。
3、其它國(guó)外標(biāo)準(zhǔn)所反映的浮游值與沉降值的關(guān)系}
下表為歐洲《聯(lián)盟藥品生產(chǎn)管理規(guī)范》（EU GMP-1998）所規(guī)定的生產(chǎn)環(huán)境標(biāo)準(zhǔn)：

上表中沉降菌換算成1h的測(cè)量值，B、C、D各級(jí)分別為1.25、12.5及25CFU/（￠90.h），B、C、D各級(jí)的浮游菌與沉降菌的測(cè)值均為8，與NASA 5340II給出的比值相近。
從某種意義上說，沉降菌的測(cè)量值的大小也反映空氣中微生物的濃度大小。但嚴(yán)格來說，它的測(cè)量值與空氣中懸浮微生物的濃度并無固定的關(guān)聯(lián)。在不同場(chǎng)所、不同情況下，沉降測(cè)值與空氣中微生物濃度的比例可能變化在很大的范圍內(nèi)。