微生物污染的檢測采樣

1、生物污染的檢測采樣儀器的選擇原則
（1）了解與分析所需采樣的活性粒子的類型
由于不同微生物自身的粒徑不等，生存形態(tài)各異，有效的載體不同等等，這些區(qū)別與差異都會影響采樣方法和采樣儀器的選擇。因此，必須有針對性的選擇采樣儀器方能獲得可靠的測量值，在這一點上與空氣中懸浮微粒的檢測相比顯得更為復雜。
（2）該活性粒子對采樣方法的敏感性
例如某些活粒子凝塊易被沖擊采樣器的沖擊力所破碎，造成活性粒子采樣的機械損失而影響采樣效率。對于此類活性粒子則宜避免選用這類采樣方法。
（3）活粒子的預期濃度
這也是需要根據(jù)經(jīng)驗作出預判斷的一個方面，例如活粒子濃度很高時，在某種儀器的小采樣量條件下獲得的采樣結果，也會因菌落重疊，難于計數(shù)，而造成較大的檢測誤差。
（4）危險區(qū)的可達性
所設定的生物污染控制危險區(qū)往往不適宜采樣或采樣的風險較大。例如，靠近手術切口上方空氣的含菌濃度是空氣環(huán)境對感染率產(chǎn)生影響的敏感部位，而恰恰在這個部位進行檢測采樣存在較多的困難與隱患，可能影響、干擾醫(yī)護人員的操作，存在較大的醫(yī)療事故風險。對于手術中的這個生物污染控制的危險區(qū)域，采樣儀器往往是不能進入的，即存在不可達性的問題。基于這種情況，就要安排其它合適的檢測采樣位置，而該部位的測值應是能反映危險區(qū)域生物污染控制效果的。
（5）極低程度生物污染的檢測能力
對于這種情況要事前判定所選采樣儀器是否能反映真實情況。譬如在ISO 5級以上的潔凈室中，由于空氣潔凈度很高，懸浮微粒稀少，如用沉降平皿采樣，則其平皿數(shù)或沉降面積和暴露時間都要大量增加，才有可能滿足檢測概率的要求。否則，按常規(guī)方法操作，平皿的讀值都可能為“0”，但這并未反映低濃度污染的真實情況。因此，在對極低程度生物污染環(huán)境選擇檢測儀器和方法時，要格外重視其檢測能力。如果使用其它帶吸氣動力源的微生物采樣裝置時，其采樣空氣量、采樣持續(xù)時間也應與一般污染環(huán)境不同，要依據(jù)采樣概率來分析與計算必要的采樣空氣量，再決定所選儀器的單位時間采樣量和采樣時間。
（6）采樣儀器對所監(jiān)測工藝或環(huán)境的影響
這也是選擇檢測儀器和檢測方法時必須考慮的問題。例如某些微生物采樣器噪聲較大，如果用于手術中的微生物采樣，就要顧忌其是否影響、干擾醫(yī)護人員的正常操作。
2、采樣計劃的制定
采樣計劃首先應該明確所檢測、監(jiān)測的生物污染控制區(qū)的潔凈度、生物污染控制水平，這些指標是依據(jù)工作人員的安全、保護工藝和保證產(chǎn)品的質量，以及保障環(huán)境的需要來確定的。這些指標通常由業(yè)主、使用單位提出。
（1）采樣計劃
采樣計劃必須以正式文件的形式確定下來，以作為生物污染檢測工作所依據(jù)的證明文件。此文件經(jīng)業(yè)主、承包商或檢測單位共同認可，并符合國內、的相關規(guī)范。這個有關采樣計劃的證明文件，對生物污染數(shù)據(jù)的準確評價與解釋是*的。采樣計劃中應明確檢測時該區(qū)域所處的狀態(tài)。一般情況下，生物污染檢測是在動態(tài)條件下，甚至選擇在該區(qū)域活動頻繁的時間段。當然，靜態(tài)條件下的檢測也是需要的，它能對潔凈室的設計與效能提供有用的信息，并可作為運行中比對的原始資料。采樣計劃文件中應就檢測狀況予以明確規(guī)定。
（2）采樣點的選擇與數(shù)量
除均布測點外，危險區(qū)域通常宜增點測點。例如生物潔凈手術室的手術床周圍，一般都會額外增設測點。
1）沉降菌
我國國家標準GB/T 16293-1996《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）沉降菌的測試方法》（2006版的《醫(yī)藥工業(yè)潔凈廠房設計規(guī)范》仍遵循此測試方法）中關于測點的規(guī)定如下表：
沉降法的少采樣點數(shù)目

注：表中的面積，對于單向流潔凈室，是指送風面積；對于非單向流潔凈室是指房間的面積
表中的潔凈度級別，依原有習慣按美國聯(lián)邦標準209的分級劃分，表中的英制100級相當ISO 5級，10000級相當于ISO 7級，100000級相當于ISO 8級。
表中所規(guī)定的沉降菌測點數(shù)與住房和城鄉(xiāng)建設部行業(yè)標準JGJ 71-90 《潔凈室施工及驗收規(guī)范》所規(guī)定的空氣中懸浮微粒采樣的低采樣點數(shù)是*一致的。
工作區(qū)采樣點的位置，一般略高于工作面，即離地0.8～1.5m。
在關鍵設備或關鍵活動范圍處可增加采樣點。
根據(jù)ISO 14644-1的規(guī)定，空氣中懸浮微粒測定的采樣點數(shù)較之大為削減，至于沉降菌的測點數(shù)是否參照現(xiàn)行標準執(zhí)行，尚有待研究決定。尤其是在動態(tài)條件下按國內現(xiàn)行標準進行沉降菌的監(jiān)測，表中所列測點數(shù)對于面積較大的高級別生物潔凈室，在實施時困難是較大的。
2）浮游菌
我國國家標準GB/T 16294-1996《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）浮游菌的測試方法》中（2006版的《醫(yī)藥工業(yè)潔凈廠房設計規(guī)范》仍遵循此測試方法）關于測點的規(guī)定如下表所列，表中區(qū)別驗證與監(jiān)測兩種不同情況給出了不同的采樣點數(shù)。
浮游菌測試的少采樣點數(shù)目

注：1、表中的面積，對于100級的單向流潔凈室，包括層流工作臺，指的是送風口表面積；對于10000級、100000級的非單向流潔凈室，指的是房間面積。
    2、日常監(jiān)測的采樣點數(shù)目由生產(chǎn)工藝的關鍵操作點來確定。
浮游菌采樣測點的位置一般離地面0.8～1.5m。送風口測點位置一般距出風面0.3m左右，測點位置也宜離開污染較集中的回風口1m以上。對于關鍵設備與關鍵工作活動范圍處宜增加測點數(shù)。
3）采樣點均布方法
對于均布采樣點的布置方法，GB/T 16293-1996和GB/T 16294-1996還提供了一些測點布置圖供參考：

國家標準GB 50333-2002《醫(yī)院潔凈手術部建筑技術規(guī)范》關于不同級別手術室監(jiān)測時的測點數(shù)與位置如下表所列。無論是塵粒數(shù)、浮游菌、沉降菌采樣，均按下表執(zhí)行。

手術室面積一般在20～60m²范圍，通常是高級別的面積較大，低級別的面積稍小。以單位面積的測點數(shù)推算，上表所列采樣點數(shù)與國內現(xiàn)行的其它標準基本一致。
3、采樣量的要求
采樣量偏小可能提供不了具有代表性的結果，過大的采樣量又將增加工作量，降低工作效率，國標GB/T 16293、GB/T16294分別作出了一些規(guī)定，可供參考。
（1）沉降菌
GB/T16294-1996對于沉降菌的培養(yǎng)皿數(shù)有如下規(guī)定：在滿足所規(guī)定的少測點數(shù)的同時，還宜滿足所規(guī)定的少培養(yǎng)皿數(shù)，如下表所列：
國家標準GB 50333-2002《醫(yī)院潔凈手術部建筑技術規(guī)范》對沉降菌測試少培養(yǎng)皿數(shù)規(guī)定如下表所列：

（2）浮游菌
GB/T 16293-1996關于浮游菌檢測時，根據(jù)日常監(jiān)測與環(huán)境驗證的不同情況，給出了每次小采樣量的規(guī)定值，如下表所列：

國家標準GB 50333-2002《醫(yī)院潔凈手術部建筑技術規(guī)范》對懸浮微粒采樣量的規(guī)定是：每次采樣的小采樣量100級區(qū)域為5.66L，以下各級區(qū)域為2.83L。關于浮游菌的測試，GB 50333-2002的規(guī)定如下表所列：

4、檢測與監(jiān)測的頻率
生物污染受控環(huán)境的檢測與潔凈室的檢測相類似，在建設與常規(guī)運行過程中應有以下的檢測計劃。
（1）竣工驗收檢測；
（2）生物潔凈室綜合性能評價；
（3）定期監(jiān)測。
此外，發(fā)生以下情況時需要額外安排檢測或調整監(jiān)測頻率，其中有些情況也是生物污染受控環(huán)境所*的。
（1）生物污染受控環(huán)境連續(xù)超過報警值或動作值，需立即進行干預，以查明原因并采取糾正措施。
（2）生物潔凈室長期停運之后，在正式啟用之前需進行檢測。
（3）在危險區(qū)檢測到傳染媒介時。
（4）對通風空調凈化系統(tǒng)進行重大維護工作之后。
（5）對生物潔凈環(huán)境產(chǎn)生影響的工藝變更之后。
（6）改變清潔或消毒方法之后。
（7）可能會造成生物污染的意外事故發(fā)生之后。
5、樣品處理與培養(yǎng)
這也是生物污染受控環(huán)境有別于工業(yè)潔凈室（ICR）檢測的主要方面。截止目前，生物污染受控環(huán)境普遍采用的檢測方法，其采樣都要經(jīng)過一定時間的培養(yǎng)才能得出結果。正因為如此，對生物潔凈室的采樣要格外細心，避免差錯，通常要注意以下幾個方面：
（1）樣品標識
1）每個采樣的樣品都應包含以下信息，以便在獲得培養(yǎng)數(shù)據(jù)后，為正確分析檢測結果提供可靠的依據(jù)。
2）采集日期和時間。
3）采集當時進行的活動以及偏離采樣計劃之處。
4）采樣人。
5）培養(yǎng)基類型。
（2）樣品處理方法
樣品從各采樣點收集后，要運送到集中培養(yǎng)處，在運輸或處理過程中不應影響所采集到的微生物的活性與數(shù)量，以下方面應予以注意：
1）運輸和儲存的條件是否適宜，進入正式培養(yǎng)前的時間是否偏長。
2）中和介質和滲透稀釋液的正確使用。
（3）樣品培養(yǎng)
培養(yǎng)基是按照所選定的微生物種類，并根據(jù)采樣環(huán)境、采樣方法及所使用的設備來確定的，不同微生物及培養(yǎng)基的培養(yǎng)條件有所不同。
為了保證采樣與培養(yǎng)的結果有效，培養(yǎng)基的品質十分關鍵。除了其組分、性能的可靠外，培養(yǎng)基容器外表面的潔凈度十分重要，通常需要二層或三層包裝。如有可能，在選擇培養(yǎng)基的培養(yǎng)溫度和時間時，要考慮對預期采集到的微生物有利的生長條件。